Рибонуклеаза поджелудочной железы содержит
Большая Энциклопедия Нефти Газа
Панкреатическая рибонуклеаза
Рибонуклеаза панкреатическая — фермент, осуществляющий гидролиз дрожжевой РНК. Обнаружен Джонсом в панкреатической железе. Панкреатическая РНК-аза расщепляет РНК с образованием З — монофосфатов или же олигонуклеотидов с 3 -фосфатным нуклеотидом на конце. При температурах выше 65 С панкреатическая рибонуклеаза инактивируется. В результате структурных исследований нолностью расшифровано первичное строение этого белка-фермента и осуществлен его полный химический синтез. Панкреатическая РНК-аза расщепляет связь между фосфатом, присоединенным к атому С-3 — пиримидинового нуклеотида, и С-5 — кислородом соседствующего с ним нуклеотида. Внутримолекулярная атака фермента на фосфодиэфирную связь происходит при участии 2 -гидроксильной группы. При этом обязательно образуется промежуточный 2 — 3 -циклофосфат, который затем гидролизуется тем же ферментом с образованием свободного пиримидин — З — фосфата или же олигонуклеотида с пиримидин — З — фосфатным нуклеотидом на конце. Нельзя считать абсолютной специфичность панкреатической РНК-азы по отношению к пиримидиновым нуклеотидам, поскольку диэфирные связи в полинуклеотиде, возникающие при наличии Аф, также расщепляются ферментом, хотя и в значительно меньшей степени, чем фосфодиэфирные, образующиеся пирими-динами.
Повторное свертывание модифицированных белков дает информацию о процессе свертывания. Исследования повторного свертывания нативных белков были дополнены опытами по повторному свертыванию модифицированных белков. В ранних исследованиях 445 ] было показано, что рибонуклеаза поджелудочной железы, нодинированная по расположенному на поверхности нативной структуры Туг-115, после денатурации теряет способность к повторному свертыванию. Эго показывает, что состояние остатка Туг-115 имеет важное значение для процесса свертывания. Для того чтобы установить, можно ли модифицировать белок ( путем расщепления цепи и делеций в последовательности или путем присоединения объемных групп к боковым цепям) без потери им способности к свертыванию, был проведен ряд систематических исследований нуклеазьг стафилококка и панкреатической рибонуклеазы .
Первая группа — близкие аналоги субстратов, содержащие весь набор или, по крайней мере, большую часть групп, узнаваемых активным центром фермента, и поэтому образующие комплекс фермент — аналог, сходный с комплексом фермент — субстрат. Однако в силу специфики своей структуры они не подвергаются ферментативному превращению. Занимая активный центр, эти аналоги препятствуют связыванию субстрата и тем самым ферментативной реакции. Например, соединение ( 95) имеет весь набор групп, узнаваемых панкреатической рибонуклеазой ( см. рис. 59, 60), но CJb-группа, стоящая вместо атома 5 — 0 субстрата, не способна принять протон от протонированного His-119 и расщепления связи Р — — С не происходит. Фенилпропионовая кислота содержит карбоксильную группу и гидрофобный фенильный радикал, в связи с чем связывается с активным центром карбокси пептид азы А ( см. рис. 62), но не имеет амидпой группировки и никакому превращению ферментом поэтому не подвергается. Оба указанных соединения являются типичными конкурентными ингибиторами соответственно панкреатической рибонуклеазы и карбоксипептидазы А.
Возможно, что рибонуклеозид-5 — трифосфаты являются истинными промежуточными предшественниками РНК. Такие общие ЦЦА-концевые группировки найдены в низкомолекулярных растворимых РНК, которые служат переносчиками аминокислот при биосинтезе белков. Кратковременная обработка диэстеразой змеиного яда освобождает эти концевые группы и нарушает биологическую активность. Последняя может быть восстановлена при инкубации продукта с очищенной ферментной системой и рибонуклеозид-5 — трифосфатами. Фракционированием транспортного РНК-белкового комплекса была получена частично очищенная ферментная система, которая катализирует пирофосфоролиз только трех концевых нуклеотидов в присутствии неорганического пирофосфата. Аналогичным исследованием, в котором меченый полимер гидролизовали панкреатической рибонуклеазой ( вновь с переносом Р32), было показано, что около 65 % препарата содержит пиримидин — АЦЦА-концевые группы, а 17 % содержат на акцепторном конце последовательность пиримидин — ГЦЦА. При изучении гидролизата были найдены и другие концевые последовательности, например фЗТАЦЦА ( 3 1 %), фЗ АГЦЦА ( 3 6 %), фЗ ААЦЦА ( 1 1 %), фЗ УАЦЦА ( 7 2 %) и фЗ АУЦЦА ( 1 4 %), причем всем им должны предшествовать пиримидиновые нуклеотиды.
Путь б — специфическое расщепление полинуклеотидной цепи на блоки с последующей расшифровкой строения образующихся таким путем блоков и воссозданием первичной структуры исходного полимера — предъявляет значительно менее жесткие требования к специфичности и полноте протекания превращений. Расщепление проводится однократно, и возникающие при этом ошибки не накапливаются. Для избирательного расщепления полинуклеотидной цепи могут быть использованы химические или химико-ферментативные методы. В первом случае необходимо, чтобы химиче-v екая модификация приводила к лабилизации межнуклеотидных А связей. Такие реакции, обладающие групповой специфичностью j ( разрушение всех пиримидиновых или отщепление всех пуриновых у оснований), широко используются для изучения распределения нуклеотидов в молекуле ДНК. Аналогичные методы для РНК об — ладают более высокой специфичностью. Второй метод расщепле-i ния — химико-ферментативный — заключается в избирательном химическом изменении структуры определенных нуклеозидных звеньев, приводящем к повышению стабильности соответствующих межнуклеозидных связей к действию нуклеаз, и последующем действии нуклеаз. Так, после модификации урацильных ядер гидр-оксиламином или карбодиимидом панкреатическая рибонуклеаза расщепляет РНК только по цитидиновым звеньям, что равносильно использованию цитидил-рибонуклеазы, не найденной в природных объектах.
. © Copyright 2008 — 2014 by Знание
Больше информации по теме: https://www.ngpedia.ru
Источник
Латинское название: Ribonuclease
Код ATX: D03BA
Действующее вещество: рибонуклеаза (ribonuclease)
Производитель: Самсон-Мед (Россия)
Актуализация описания и фото: 25.10.2018
Рибонуклеаза – ферментный препарат с протеолитической активностью.
Форма выпуска и состав
Лекарственная форма выпуска Рибонуклеазы – лиофилизат для приготовления раствора для инъекций и местного применения: лиофилизированная масса белого со слабым желтоватым оттенком или белого цвета в виде комочков, таблетки, пластинок или порошка (во флаконах объемом 5 мл, в картонной пачке 10 флаконов).
Активное вещество в составе 1 флакона: рибонуклеаза – 10 мг.
Фармакологические свойства
Фармакодинамика
Рибонуклеаза относится к числу ферментных препаратов, получаемых из поджелудочной железы крупного рогатого скота.
Оказывает противовоспалительное действие. Деполимеризует РНК до кислоторастворимых олиго- и монопептидов. Разжижает густую и вязкую мокроту, слизь, гной. Благодаря разрушению нуклеиновых кислот, задерживает размножение ряда РНК-содержащих вирусов.
Показания к применению
- болезни дыхательных путей, протекающие с трудноотделяемой вязкой мокротой (ателектаз легкого, абсцессы легких, бронхоэктатическая болезнь, экссудативный плеврит);
- трофические язвы, свищи, гнойные раны, абсцессы;
- гингивит, пародонтоз;
- острый/обострение хронического среднего отита, включая в перфоративной стадии;
- острый/обострение хронического синусита;
- клещевой энцефалит (при тяжелом течении, в комбинации со специфическим гамма-глобулином);
- тромбофлебит.
Противопоказания
Абсолютные:
- хроническая сердечная недостаточность II–III стадии;
- нарушения функций печени;
- дыхательная недостаточность;
- открытая форма туберкулеза легких;
- геморрагический диатез;
- индивидуальная непереносимость любого компонента препарата.
Относительные (Рибонуклеаза назначается под врачебным контролем):
- эмпиема плевры туберкулезной этиологии (связано с тем, что рассасывание экссудата может способствовать возникновению бронхоплевральной фистулы);
- беременность и период лактации.
Инструкция по применению Рибонуклеазы: способ и дозировка
Рекомендованная схема применения:
- ингаляционно: 25 мг на 1 процедуру (лиофилизат следует растворить в 3–4 мл 0,9% раствора хлорида натрия или в 0,5% растворе прокаина); для проведения ингаляций должен использоваться мелкодисперсный аэрозоль;
- внутриплеврально: 25–50 мг в 5–10 мл 0,9% раствора хлорида натрия или 0,2% раствора прокаина;
- эндобронхиально: 25–50 мг с помощью катетера или гортанного шприца (в т. ч. при бронхоскопии);
- местно при гингивите и пародонтозе: 1% раствор (в 0,5% растворе прокаина) в виде ватных тампонов в десневые карманы и аппликаций вокруг шейки зуб; применяют ежедневно курсом 10 дней, длительность процедуры – 30 минут;
- местно при ранах и язвах: присыпают язвенную/раневую поверхность порошком в количестве 25–50 мг и прикладывают тампоны/салфетки, смоченные раствором препарата в 0,9 % растворе хлорида натрия, продолжительность курса – 2–10 дней;
- местно при синуситах: 5–10 мг Рибонуклеазы в 3–5 мл 0,9% раствора хлорида натрия вводится в верхнечелюстную (гайморову) пазуху после промывания и пункции; через 30 минут следует промыть раствором хлорида натрия;
- местно при отитах: 0,5–1 мл 0,1% раствора, приготовленного на 0,9% растворе хлорида натрия, вводится в ухо; через 30 минут следует промыть раствором хлорида натрия.
Максимальная разовая доза при внутриполостном/местном введении – 50 мг.
Внутримышечно Рибонуклеаза вводится по 5–10 мг в 1 мл 0,9 % раствора хлорида натрия или 0,5% раствора прокаина; курс терапии составляет 2–10 инъекций, проводят по 1–2 инъекции в день.
При лечении клещевого энцефалита Рибонуклеаза вводится внутримышечно 6 раз в день (с интервалом 4 часа).
Разовая доза составляет:
- дети 1–3 лет (определяется массой тела): 5–8 мг;
- дети 4–6 лет: 10–14 мг;
- дети 7–11 лет: 15–18 мг;
- дети 12–15 лет: 20 мг;
- взрослые: 25–30 мг.
Перед инъекцией необходимое количество препарата следует растворить в 2 мл 0,25 или 0,5 % раствора прокаина.
До применения нужно провести пробу на чувствительность: в область сгибательной поверхности предплечья вводится внутрикожно 0,1 мл раствора. Если развитие местных/общих реакций не отмечается, через 60 минут можно ввести полную дозу. Применение Рибонуклеазы прекращают через 2 дня после нормализации температуры.
Побочные действия
Возможные побочные реакции: гипертермия, аллергические реакции, тахикардия.
При внутримышечном введении могут развиваться местные реакции: гиперемия и болезненность в месте введения раствора. При ингаляционном введении возможна охриплость и раздражение слизистых оболочек верхних дыхательных путей.
Передозировка
Сведения не представлены.
Особые указания
Сведения не представлены.
Применение при беременности и лактации
Данных о применении Рибонуклеазы у женщин в период беременности/лактации нет.
При нарушениях функции печени
Согласно инструкции, Рибонуклеазу противопоказано назначать при печеночной недостаточности.
Лекарственное взаимодействие
Сведения не представлены.
Аналоги
Аналогами Рибонуклеазы являются: Дезоксирибонуклеаза, Химопсин, Химотрипсин, Ронидаза, Терридеказа.
Сроки и условия хранения
Хранить в месте, защищенном от света, при температуре до 25 °C. Беречь от детей.
Срок годности – 2 года.
Условия отпуска из аптек
Отпускается по рецепту.
Отзывы о Рибонуклеазе
Отзывы о Рибонуклеазе немногочисленные. Отмечается эффективность препарата при его применении по показаниям.
Цена на Рибонуклеазу в аптеках
Примерная цена на Рибонуклеазу (за 10 флаконов в упаковке) составляет 642–653 рубля.
Информация о препарате является обобщенной, предоставляется в ознакомительных целях и не заменяет официальную инструкцию. Самолечение опасно для здоровья!
Источник
Русское название
Рибонуклеаза
Латинское название вещества Рибонуклеаза
Ribonucleasum (род. Ribonucleasi)
Фармакологическая группа вещества Рибонуклеаза
- Ферменты и антиферменты
Типовая клинико-фармакологическая статья
1
Фармдействие. Ферментный препарат, получаемый из поджелудочной железы крупного рогатого скота. Деполимеризует РНК до кислоторастворимых моно- и олигопептидов. Разжижает гной, слизь, вязкую и густую мокроту; оказывает противовоспалительное действие. Разрушая нуклеиновые кислоты, задерживает размножение некоторых РНК-содержащих вирусов. Активность рибонуклеазы определяют биологическим методом по количеству кислоторастворимых веществ, высвобождаемых в результате гидролиза РНК в определенных условиях. Одна единица активности (ЕА) соответствует 1 мг препарата.
Показания. Заболевания дыхательных путей с вязкой трудноотделяемой мокротой (бронхоэктатическая болезнь, абсцессы легких, ателектаз легкого, экссудативный плеврит); пародонтоз, гингивит; остеомиелит, свищи, абсцессы, трофические язвы, синусит (острый и обострение хронического), отит (острый и обострение хронического, в т.ч. в перфоративной стадии), тромбофлебит; клещевой энцефалит (при тяжелом течении заболевания, в сочетании со специфическим гамма-глобулином); вирусный менингит.
Противопоказания. Гиперчувствительность, ХСН II–III ст., дыхательная недостаточность, печеночная недостаточность, туберкулез (открытая форма), кровоточивость.
С осторожностью. Эмпиема плевры (туберкулезной этиологии).
Дозирование. При местном применении присыпают раневую или язвенную поверхность порошком в количестве 25–50 мг и прикладывают салфетки или тампоны, смоченные раствором препарата в 0,9% растворе NaCl.
Для ингаляций используют мелкодисперсный аэрозоль — 25 мг на 1 процедуру (для этого препарат растворяют в 3–4 мл 0,9% раствора NaCl или в 0,5% растворе прокаина).
Эндобронхиально вводят раствор, содержащий 25–50 мг, при помощи гортанного шприца или катетера.
Внутриплеврально — 25–50 мг в 5–10 мл 0,9% раствора NaCl или 0,2% раствора прокаина.
При синуситах — 5–10 мг в 3–5 мл 0,9% раствора NaCl в верхнечелюстную (гайморову) пазуху после пункции и промывания; при отитах — 0,1% раствор (0,5–1 мл) в наружный слуховой проход.
В/м вводят 5–10 мг в 1 мл 0,9% раствора NaCl или 0,5% раствора прокаина; курс лечения — 2–10 инъекций, по 1–2 инъекции в день. Максимальная разовая доза при в/м инъекции — 10 мг, при местном и внутриполостном введении — 50 мг.
Для лечения клещевого энцефалита — в/м, 6 раз в сутки, в разовой дозе — 25–30 мг; детям 1–3 лет — 5–8 мг (в зависимости от массы тела), 4–6 лет — 10–14 мг, 7–11 лет — 15–18 мг, 12–15 лет — 20 мг.
Необходимое количество препарата растворяют перед инъекцией в 2 мл 0,25–0,5% раствора прокаина. Перед началом лечения проводят пробы на чувствительность к препарату: на сгибательную поверхность предплечья вводят в/к 0,1 мл; терапию проводят при отсутствии местной и общей реакции.
Побочное действие. Раздражение слизистых оболочек дыхательных путей, аллергические реакции.
Особые указания. Рассасывание экссудата при эмпиеме плевры туберкулезной этиологии может способствовать развитию бронхоплевральной фистулы.
[1]
Государственный реестр лекарственных средств. Официальное издание: в 2 т.- М.: Медицинский совет, 2009. — Т.2, ч.1 — 568 с.; ч.2 — 560 с.
Торговые названия
Источник
Все ферменты,
гидролизующие полинуклеотидные цепи,
можно отнести к числу фосфодиэстераз,
поскольку они разрушают фосфодиэфирные
связи. Они делятся на две группы:
эндонуклеазы;
экзонуклеазы.
Эндонуклеазы
разрушают связи внутри полинуклеотидной
цепи. Под действием этих ферментов цепь
распадается на фрагменты, размеры
которых могут варьировать от мононуклеотидов
до кислоторастворимых полинуклеотидов.
Иногда эндонуклеазы называют
нуклеодеполимеразами или
нуклеофосфодиэстеразами.
Экзонуклеазы
расщепляют полинуклеотидную цепь путем
последовательного отщепления
мононуклеотидов с одного конца цепи.
Обычно их называют фосфодиэстеразами.
Экзонуклеазы
делятся на две основные группы:
разрушающие РНК
– рибонуклеазы или РНК-азы;разрушающие ДНК
– дезоксирибонуклеазы или ДНК-азы.
Из различных
источников сырья в настоящее время
получены разнообразные формы рибонуклеаз,
из которых наиболее изучена панкреатическая
РНК-аза, т.е. выделенная из поджелудочной
железы.
Рибонуклеаза
характеризуется устойчивостью в широких
пределах рН и значительной термостабильностью
в слабокислых растворах, но легко
инактивируется щелочами. На ДНК
рибонуклеаза не действует. Фермент
обладает ярко выраженными антигенными
свойствами. Максимальная активность
фермента проявляется в области рН от
7,0 до 8,2 с оптимумом при рН 7,7. Температурный
оптимум рибонуклеазы – 65оС.
Действие рибонуклеазы
направлено в основном на разрыв связи,
соединяющей фосфатный остаток при С-3’
в пиримидиннуклеотиде с С-5’ следующего
нуклеотида. Например, нижеприведенный
нуклеотид будет разрушаться РНК-азой
следующим образом:
фАфЦфУфГфА→фАфЦф+Уф+ГфА.
Поэтому рибонуклеазу
можно рассматривать как высокоспецифичную
фосфодиэстеразу, гидролизующую только
вторичные фосфорные группы
пиримидиннуклеозид-3’-фосфаты. Если
РНК-аза действует на РНК в течение
короткого промежутка времени, то
первичными продуктами распада оказываются
циклические 2’, 3’-фосфаты цитидина и
уридина. Эти циклические фосфаты медленно
гидролизуются рибонуклеазой, образуя
пиримидин-3’-фосфаты либо в виде свободных
нуклеотидов, либо в виде концевых
нуклеотидных остатков в олигонуклеотиде.
Получение РНК-азы
Обычно РНК-азу
выделяют из свежей бычьей поджелудочной
железы путем экстракции 0,25 н серной
кислотой при 0÷5оС.
Для очистки от балластных белков в
реакционную массу добавляют сернокислый
аммоний до концентрации 65%. При этом в
осадок переходят трипсиноген,
химотрипсиноген и дезоксирибонуклеаза.
Затем в фильтрат добавляют сернокислый
аммоний до 85% концентрации. При этом в
осадок выпадает рибонуклеаза. Полученный
фермент можно в дальнейшем очистить
перекристаллизацией из этилового
спирта.
В данной работе
для осаждения РНК-азы используется
прием осаждения в изоэлектрической
точке (для РНК-азы 8,5÷9,1).
Ход работы
1. 100 г свежей
поджелудочной железы быка смешивают
с ледяной 0,25 н серной кислотой при 5оС
в соотношении по объему 1:2, т.е. на 100 г
железы берут 200 мл 0,25 н серной кислоты
и 33,5 мл 96% этанола, который необходим
для повышения эффективности фильтрации
на последующих стадиях технологического
процесса.
2. Суспензию
выдерживают при 0÷5оС
в течение 6 ч. Затем суспензию фильтруют
через бумажный фильтр. В фильтрате
измеряют содержание белка по методу
Лоури и активность РНК-азы по методу
Кальницкого. Пробу для анализа необходимо
развести в 50 раз дистиллированной водой.
3. Полученный
фильтрат защелачивают 25% раствором
аммиака до рН 7,8÷8,0. Раствор с осадком
оставляют на 1 ч в холодильнике.
4. Осадок рибонуклеазы
отделяют центрифугированием при 6000
об/мин в течение 15 мин. Измеряют объем
надосадочной жидкости. Осадок промывают
в центрифужных стаканах 10÷20 мл 96% этанола
и высушивают в центрифуге при 2000 об/мин
в течение 20 мин.
5. В надосадочной
жидкости измеряют активность по методу
Кальницкого и содержание белка по методу
Лоури. Пробу для анализа необходимо
развести в 25 раз дистиллированной водой.
6. Полученный осадок
РНК-азы взвешивают на аналитических
весах и определяют выход препарата по
отношению к массе исходной поджелудочной
железы.
7. В 100 мл воды
растворяют 10 мг РНК-азы и определяют
активность РНК-азы по методу Кальницкого
и содержание белковых веществ по методу
Лоури.
8. По результатам
работы рассчитывают степень осаждения
общего белка и степень осаждения
рибонуклеазы в изоэлектрической точке:
ХР
= 1-(снж∙Vнж/сир∙Vир);
ХИЭТ
=
1-(Анж∙Vнж/Аир∙Vир),
где снж
и сир
– соответственно концентрации белка
в надосадочной жидкости и в исходном
растворе, г/л;
Анж
и Аир
– соответственно активность РНК-азы в
надосадочной жидкости и в исходном
растворе, ед/л;
Vн/о
и Vи
– соответственно объем надосадочной
жидкости и исходного раствора, л.
Контрольные
вопросы
Роль нуклеиновых
кислот в микробной клетке.Пути утилизации
нуклеиновых кислот в микробной клетке.Классификация
нуклеаз.Отличие между
экзо- и эндонуклеазами.Методы очистки
ферментных препаратов.
Соседние файлы в предмете Биофизхимия
- #
10.02.2017599.55 Кб13Thumbs.db
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник
